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    非洲豬瘟的診斷和防治研究進展

    時間:2022-09-02    點擊: 次    來源:北斗農科    作者:張濤 譯 - 小 + 大

    摘要:非洲豬瘟(African swine fever,ASF)是一種病毒性、出血性疾病,對家豬和歐亞野豬的致死率極高。本文介紹了非洲豬瘟診斷的現有技術和障礙,并就防控策略進行了論述,最后介紹了非洲豬瘟疫苗研究存在的難點以及就進一步研究的方向。

    關鍵詞:非洲豬瘟;診斷;防治;疫苗

    非洲豬瘟(African swine fever,ASF)是一種病毒性、出血性疾病,對家豬和歐亞野豬具有極高的致死率。盡管引發該病的病毒——非洲豬瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的宿主范圍有限,也不可能會引發人畜共患病,但其對社會、經濟的影響非常大,許多利益相關者都被牽涉其中。出于這個原因,一旦豬群暴發該病,發病地的相關行業管理部門應向世界動物衛生組織通報。目前,對非洲豬瘟的控制仍依賴于嚴格的衛生措施,因為現今既沒有獲得許可的疫苗,也沒有任何有效的治療方法。

    1  非洲豬瘟的診斷

    1.1 目前的技術水平和障礙

    在實際生產中,當對ASF執行早期預警、及時干預和監測時,采用快速和可靠的診斷方法極為重要。好的檢測方法應能夠檢測ASFV的所有基因型和突變體,具有高靈敏度和特異性,應根據世界動物衛生組織的指南驗證,且易于操作,能夠快速解釋檢測結果。另外,應始終以合理的價格提供,能適應于高通量的應用。這種檢測需要伴隨潛在的能夠區分野毒株感染動物和疫苗接種動物(differentiating infected from vaccinated animal,DIVA)。顯然,并非所有的特性都能同時滿足,為此,應建立診斷工作流程,考慮所用檢測方法的優點和缺點。這可能包括使用欄邊檢測法(pen-side approaches),也包括替代性或非侵入性的采樣策略。后者對診斷野豬群是否感染ASF具有特殊意義。最近研究人員探討了通過豬的唾液、拭子樣本或誘餌來檢測病原體,并證明這些方法可用于豬瘟的檢測。

    由于需要向世界動物衛生組織通報,相關建議和法律都對實驗室診斷進行了規定。診斷方法和準則可在《世界動物衛生組織陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》(OIE,2019),或歐盟ASF參考實驗室官網(https://asf-referencelab.info/asf/en/procedures-diagnosis/sops)上找到。鑒于ASF在一些歐盟成員國,特別是在西班牙和葡萄牙的歷史意義,針對非洲豬瘟的診斷指南和法律條文已經相當成熟,歐洲以外的國家可以直接借鑒這些指南和法律條文。

    總的來說,現有針對ASF的可靠的直接和間接診斷方法對家豬和野豬的特定樣本都能發揮作用。當檢測來自家豬或野豬的高質量樣本時,檢測的準確性沒有差別(它們實際上是同一物種)。這些檢測方法包括從豬巨噬細胞分離病毒、(實時)聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)、酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)、免疫印跡和間接免疫染色標記技術。然而,直到最近,這些測試方法中的大部分都是建立在“內部”準則基礎上的,只有通過使用實驗室間的對比測試才能保證檢測結果的可比性。對于資源有限的國家而言,經過充分驗證和易于使用的測試系統才有利于推廣使用。在這里,定價合理且不需要額外耗材的商用試劑盒是關鍵。

    目前的情況和以方法論為導向的研究項目已經促使這種情況有所改善,一些ELISA、實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)以及側流檢測(lateral flow assay,LFA)試劑盒已經進入市場。事實上,用于診斷ASF的商用PCR方法和ELISA方法的種類越來越多,制造商分布在全球各地。雖然大多數檢測都能正常工作,但并不總是存在可比較的數據。由于德國對該國用于法定動物傳染病和須報告動物傳染病的任何檢測試劑盒都有官方許可程序,因此此類試劑盒有基本的數據,并且可以在德國官方收集的法定動物傳染病的檢測方法(https://www.fli.de/en/publications/amtliche-methodensammlung/)中總是可以找到最新的清單。到目前為止,德國已經批準了8種商用實時PCR方法,并在地區實驗室中用于排除性診斷和監測。所有這些檢測方法都已在德國國家參考實驗室(national reference laboratory,NRL)用一組確定的實驗樣本進行了測試,這些樣本代表ASFV的不同基因型(主要是ASFV基因Ⅰ型和Ⅱ型)、宿主物種、基質和感染狀態。Schlottau已經在德國國家實驗室對其中一些商用PCR方法和三種日常使用的自動提取方法進行了更詳細的比較。根據制造商提供的使用說明書,在KingFisher提取平臺(Thermo Fisher Scientific)上使用NucleoMag? VET(Macherey-Nagel)、MagAttract Virus M48(Qiagen)和MagMAXTM CORE(Thermo Fisher Scientific,workflow C)試劑盒提取核酸??偟膩碚f,所有的試劑盒都是合適的,在下游應用中可以給出可靠的結果。在PCR試劑盒方面,King等對virotype ASFV PCR試劑盒、INgene q PPA試劑盒、RealPCR ASFV DNA和ID GeneTM非洲豬瘟Duplex進行了相互之間的比較同時與世界動物衛生組織推薦的檢測法進行比較。所有的試劑盒都能給出可靠的結果,但在使用不能令人信服的樣本時有略微的差異。最近,Schoder等發表了用7種市售PCR試劑盒和3種PCR組合試劑盒檢測樣本中ASFV的比較數據,這些試劑盒分別為:virotype ASFV 2.0 PCR試劑盒,Adiavet ASFV Fast Time,Bio-T kit ASFV,VetMax ASFV 檢測試劑盒,RT-PCR ASFV DNA Test,VetAlert ASF PCR檢測試劑盒,以及ID GeneTM ASF Duplex。簡而言之,研究人員在2018—2019年ASF疫情暴發期間,對比利時收集的300份特征明顯的野豬樣本進行了敏感性和特異性測試。這項研究證實,所有商用試劑盒和三分之二的Taq聚合酶適用于診斷實驗室進行ASFV檢測。這與上述經驗相符,并證實了商用試劑盒適用于快速和用戶友好型診斷。

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